HSV (HSV病毒生产)
简介：
1. HSV病毒扩增
- 1.1 复苏Vero细胞；
- 1.2 待Vero细胞长满后传代，并接种细胞至T75细胞瓶，使其第二天的生长密度低于90%；
- 1.3 取HSV病毒按照一定量加入T75细胞瓶内，37℃ 5%CO2培养箱内继续培养；
- 1.4 24-72h连续观察细胞病变情况，并根据细胞病变情况收集上清储存备用。
2 HSV病毒浓缩
- 2.1 将储存备用的上清，用0.22μm过滤器进行过滤，过滤后的病毒液上清在50000g，2.5h，4℃条件下进行高速离心；
- 2.2 离心结束后，弃上清，取适量无菌1xPBS将离心管底部壁上的沉淀进行重悬，并将重悬液在50000g，2.5h，4℃条件下进行蔗糖梯度离心；
- 2.3 离心结束后，用无菌枪头缓缓吸走上清，依据病毒滴度将沉淀用无菌1xPBS进行重悬。
3 HSV病毒测滴度
- 3.1 复苏Vero细胞；
- 3.2 待Vero细胞长满后传代，并接种细胞至6孔板，使其第二天的生长密度低于90%；
- 3.3 取一支HSV病毒，按照梯度稀释法进行10倍稀释，一般稀释到10-9，稀释过程中务必将病毒液充分混合均匀；
- 3.4将稀释后的病毒液缓慢加入到对应的孔内（2个平行样），每孔100ul，37℃ 5%CO2培养箱内培养1h；
- 3.5吸除6孔板内培养液，加入琼脂培养基（1.2%琼脂+维持培养基），37℃ 5%CO2培养箱内继续培养48h；
- 3.6 加入中性红培养基（0.33%中性红+琼脂培养基），37℃ 5%CO2培养箱内继续培养24h；
- 3.7 在肉眼下对白斑个数进行计数；
- 3.8按照滴度=荧光个数x稀释倍数x10进行计算，得出最终病毒滴度。
