钙离子成像技术(Calcium imaging)是利用钙离子指示剂检测组织内钙离子浓度的方法。钙离子成像技术主要用于神经系统研究中,其中钙离子变化提示神经元活动。这项技术广泛应用于神经生物学,细胞生物学,生理学,发育生物学和药物学领域中。其中,神经生物学中主要研究神经细胞离子浓度改变引发的信号发射,生理学中主要研究肌肉运动-心肌细胞中的钙信号,细胞生物学中主要研究信号传导和离子通道,发育生物学中主要研究卵受精机制,药物学中主要用于筛选药物、药效学考察等方面。
钙离子成像技术属于光遗传学技术中的一类,实际检测的是细胞或组织中Ca2+的浓度变化,将钙浓度变化转化为荧光信号,从而使细胞电活动转化为可记录的光信号。检测的手段是利用可以感应Ca2+的浓度的钙离子指示剂完成的。钙离子指示剂分为两种,一种为化学性钙离子指示剂(chemical calcium indicators),另一种为现在普遍使用的遗传编码钙离子指示剂(genetically-encoded calcium indicators,GECIs),例如GCaMP。GCaMP由绿色荧光蛋白(green fluorescent protein , GFP)、钙调蛋白(calmodulin, CaM)和肌球蛋白轻链激酶的一段肽段序列M13构成。当有Ca2+结合CaM时,CaM发生构象变化,其轻链区可以结合M13,在特定波长的光照下GFP发色团的质子化作用增强、吸光度增加,从而使GFP发出强烈的荧光。如图1所示。
图1. GCaMP结构及作用示意图(Nature. 2013 July 18; 499(7458): 295–300.)
钙离子光纤记录是基于钙离子浓度变化的荧光成像,实时检查和记录细胞活性变化。这种技术的出现对于编码社交行为、学习记忆和恐惧等行为以及病理状态下的回路水平神经信号的探测具有里程碑式的意义。
不能用于记录单个神经元的活性。
光纤记录实验步骤:
利用双光子成像技术,在给予活体刺激时,记录被GFP标记到的神经细胞的光变化来判断神经细胞活动。该方法适用于选择大脑表面层作为研究区域。
1)在双光子显微镜中,激发光波长在700-1000nm附近,接近红外光谱。这是体内双光子成像的第一个优势。长波长的光在组织中的散射更少,穿透深度更大。
2)具有良好的分辨率,不仅允许单个神经元可视化,而且可以看到亚细胞结构轴突末端的钙活动。
双光子活体钙成像实验步骤:
类别 | 名称 | 应用 | 参考文献 |
GCaMP6系列 | GCaMP6s | 高敏感,适合低频信号的指示 | PMID: 23868258 |
GCaMp6m | 结合活性适中,适用的范围最广 | ||
GCaMp6f | 快速动力学曲线,解离最快,适合高频信号的指示 | ||
jGCaMP7系列 | jGCaMP7s | 高敏感,灵敏性可达GCaMP6s的5倍以上 | PMID: 31209382 |
jGCaMP7f | 快速动力学,其反应速度是GCaMP6s的3倍,GCaMp6f的5倍。 适用于更强的检测单动作电位反应或群体活动实验。 |
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jGCaMP7b | 较亮的基线荧光,灵敏性是GCaMP6s的3倍。适用检测神经元突起或神经纤维。 | ||
jGCaMP7c | 本底荧光低,对比度高,信号清晰,灵敏性是GCaMP6s的2.7倍。 适用于大范围成像。 |
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GCaMP-X系列 | GCaMP6-XC | 精准特异且安全无损;适合超长时程(≥4周)钙信号的监测。 | PMID: 29666364 |
CaMPARI | CaMPARI | 紫外光照后变色 | PMID: 25678659 |
CaMPARI2 | 第二代,紫外光照后变色 | PMID: 30361563 | |
jRGECO1a | jRGECO1a | 激发光波长红移,可以同GCaMP一起使用。 | PMID: 29731250 |
jRCaMP1 | jRCaMP1a | 激发光波长红移,可以同GCaMP一起使用。 | PMID: 27011354 |
jRCaMP1b | |||
Axon-GCaMP | 轴突定位 | PMID: 30127424 | |
XCaMP系列 | XCaMP-B | 蓝色、绿色、橙色、红色。结合特定的神经元特异的表达方法,可实现在自由活动状态下同时监测特定行为中三种不同神经元类型的活动; 结合双光子显微镜,进行微结构功能成像,实现对突触前和突触后结构同时双色成像。 |
PMID: 31080068 |
XCaMP-G | |||
XCaMP-O | |||
XCaMP-R |
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