RNA干扰(RNA interference,缩写为RNAi)是指一种分子生物学上由双链RNA诱发的基因沉默现象,其机制是通过阻碍特定基因的转录或翻译来抑制基因表达。当细胞中导入与内源性mRNA编码区同源的双链RNA时,该mRNA发生降解而导致基因表达沉默。如图1。
由于RNAi具有高度的序列专一性,可以特异地沉默基因,从而获得基因功能丧失或基因表达量的降低。因此可以作为功能基因组学研究的一种强有力的工具。在实际应用中,通过病毒载体表达小核RNA(snRNA)进行RNAi已经非常成熟,能够有效、快捷和持久地干扰体内基因的表达。广泛应用到基因功能研究,药物靶点筛选,细胞信号传导通路分析和疾病治疗等方向。
图1. RNAi示意图(图源:Majumdar Rajtilak et al., Frontiers in Plant Science , 2017)
1直接表达shRNA,如图2,以AAV病毒载体为例:由III型启动子(U6或H1)直接启动shRNA表达,表达能力强,表达范围广,适合广谱性表达;
图2. rAAV-直接表达shRNA载体关键元件
2 Cre依赖shRNA,如图3,以AAV病毒载体为例:由Cre重组酶调控III型启动子(U6或H1)启动shRNA表达,表达特异性由Cre的表达调控,因此需要与Cre病毒或Cre小鼠一起使用,具有表达特异和受Cre表达调控的优势,但其工作效率受Cre表达强弱的影响;
图3.rAAV-Cre依赖shRNA表达载体关键元件
3 miRNA依赖的shRNA,如图4,以AAV病毒载体为例:由II型启动子启动以miRNA为骨架表达shRNA的系统,表达能力强并且干扰效果好,可以利用II型启动子的特异性促使shRNA特异性表达。
图4.rAAV-miRNA依赖shRNA表达载体关键元件
类型 | 编号 | 产品名称 | 标签 |
直接表达shRNA | BC-0009 | pAAV-U6-shRNA(scramble)-CMV-EGFP-pA | EGFP |
BC-0010 | pAAV-U6-shRNA(scramble)-CMV-mCherry-pA | mCherry | |
结合Cre实现特异性干扰 | BC-0011 | pAAV-Efla-mCherry-U6-Loxp-CMV-EGFP-loxp-shRNA(scramble) | mCherry |
pAAV-U6-loxp-CMV-EGFP-loxp-shRNA(scramble)-pA | EGFP | ||
BC-0008 | pAAV-U6-loxp-CMV-mCherry-loxp-shRNA(scramble)-pA | mCherry | |
miRNA-30a特异性干扰 | BC-0006 | pAAV-hSyn-EGFP-5'miR-30a-MCS-3'-miR30a-WPREs | EGFP |
BC-0007 | pAAV-GFAP-EGFP-5'miR-30a-MCS-3'-miR30a-WPREs | EGFP | |
除了提供编码基因shRNA干扰服务,Braincase也提供非编码基因circRNA,lncRNA,MicroRNA干扰服务 |