成瘤性测试 (Tumorigenicity Test Introduction)

简介

肿瘤已成为人类公共健康的重大威胁，其致死率仅次于心血管疾病。根据2016年最新数据，2012年全球新增1410万患者，820万死于恶性肿瘤。在中国，癌症死亡率一直居高不下，每天约有7700个患者死于癌症。因此，肿瘤的研究也成为了现代生物学研究的重中之重，肿瘤动物模型在肿瘤发生发展及药物研发上扮演着至关重要角色。

人源肿瘤细胞系异体移植（cell derived xenograft , CDX），即将体外传代培养的肿瘤细胞接种至免疫缺陷小鼠，是研究肿瘤细胞增殖以及体内筛选药物最常用的模型之一。由于细胞体外长期传代而呈现有高同源性特点，模型建立容易、重复性好，但在体外不断培养传代过程中，肿瘤异质性与原始肿瘤组织存在较大差异。

成瘤性测试方法

裸鼠肿瘤模型是比较常见和常用的一种肿瘤动物模型，它在皮下移植瘤肿瘤模型的建立中起到重要作用。裸鼠肿瘤模型的接种一般有细胞接种和瘤块接种两种方式，接种取材有手术活检标本、癌性胸腹水标本和体外培养的细胞系三种 。

裸鼠移植瘤模型的建立具有建立周期短、成瘤率高、易于操作、成本低的优点。 裸鼠移植瘤实验常用于检测细胞的成瘤能力/抗肿瘤药物的抗癌作用。

实验准备：

• 0.25%的胰酶，含血清的培养基，PBS或者生理盐水
• 1ml注射器，细胞计数器，酒精棉球

实验操作步骤：

• 1.将计数板及盖玻片冲洗干净，晾干
• 2.常规消化细胞，离心
• 3.加入适量PBS重悬细胞，使之成为单细胞悬液
• 4.按照一定稀释倍数西施细胞悬液
• 5.细胞计数
• 6.取5*10^6个细胞，再次离心收集细胞沉淀
• 7.用0.2mlPBS或者生理盐水重悬细胞，分别放入0.5ml的EP管中，封口膜封口
• 8.选择4~6周龄的裸鼠，将裸鼠背部皮肤消毒
• 9.用1ml注射器吸取细胞悬液，将其注射入裸鼠皮下
• 10.以后每天观察裸鼠生存情况以及移植瘤的情况，测量肿瘤大小
• 11.待早肿瘤生长至直径约1.5~2cm大小时，脱颈法处死小鼠，取出肿瘤，称重，测量瘤体大小并计算体积
• 12.统计学分析

注意事项

• 1.细胞重悬时要将细胞悬液制备成单细胞悬液
• 2.计数前应将细胞彻底混匀，稀释至合适的浓度，计数一定要精准

一般实验中要将裸鼠分组，应该采取随机分组的办法，并且每组裸鼠的数量原则上越多越好，但是考虑到实验成本，一般选取每组5~10只。预实验时，选择3只可以做统计学分析即可细胞计数后，用PBS或者生理盐水重悬细胞时，最好不要超0.2ml。在接种细胞的数目上，一般情况选择5~1010^6个细胞。

肿瘤造模和成瘤测试服务请联系support@braincase.cn