MOI(Multiplicity of Infection)为感染复数,即病毒量与细胞数的比值。每种细胞对病毒的敏感性不同,同时每种病毒载体荧光强度也存在差异,另外,MOI值越高,病毒感染的可能性越大,但是对细胞的
293T细胞培养 转染前,用胰蛋白酶消化对数生长期的293T细胞,用含10 %血清的培养基调整细胞密度至5×106 细胞/15 mL,重新接种至10 cm培养皿中,37 ℃和5 % CO2的条件下培养。待细胞密度达到70 %-80 %时进
CRISPR-Cas9 技术通过人工设计 tracrRNA/crRNA,改造成具有引导作用的 sgRNA,以 引导 cas9 对 DNA 的定点切割,造成 DNA 双链的断裂,然后细胞可以利用 NHEJ 或者同源 重组的方式实现基因敲除或对基因精确
般应该从mRNA水平、蛋白质水平、细胞表型水平三个层次来检测干扰效率。mRNA水平可使用RT-PCR或Real-time PCR法检测,蛋白质水平可使用Western-blot、ELISA或免疫组化法完成检测,细胞表型水平可应用MT
生物技术层面上RNAi技术必须有适当的方式将外源性的小干扰RNA(small interference RNA,siRNA)导入到目标生物体内,siRNA一般为19~21个核苷酸大小,在生物体内经过一系列生化路径,引发RNA干扰效果。
常用转化方式有热激法和电转化法,下面以大肠杆菌为例,分别简述两种方法操作步骤。