准备分离培养 3-5 天状态良好的神经元,保证感染病毒时,细胞密度率达到 30-40 %。
即将质粒直接转入神经细胞内。对于体内的神经细胞,使用的方法有胚胎电转(in uteroeletroporation)、iontoporation;而对于体外培养的神经细胞,使用的方法有电转、钙转、脂质体转染(如lipofectami
将对数生长期的细胞消化重悬后,2*104/孔接种于96孔板中,过夜生长
根据实验目的和受试细胞选择载体,包装启动子在细胞内高效表达,具体操作详见“基因调控”中“载体构建”部分。
确定 MOI 值(实验步骤详见“细胞实验--病毒感染 MOI 预实验”中描述),并设置药物用量梯度。
将状态好的目的细胞接种于细胞培养容器中,计数后完成铺板,保证第二天感染病毒时汇合度达到20%-40%。以6孔板为例,用完全培养基制备105 个/mL的细胞悬液,其单孔底面积10 cm2,接种体积2 mL,感