小布新品｜新血清型MyoAAV——高效转导肌肉组织

研究人员建立了一种体内策略来进化和严格选择AAV的衣壳变体，这些变体能够有效地递送到所需的组织。使用这种方法，研究人员确定了一类含有RGD基序的衣壳，在小鼠和灵长类动物体内定向进化出一种工程化改造的AAV载体—MyoAAV，在小鼠和非人类灵长类动物静脉注射后，能够高效靶向肌肉组织，递送到肌肉组织的效率是传统病毒载体的10倍以上。同时，与传统递送载体相比，该载体在遗传性肌肉疾病中的治疗剂量降低大约100到250倍，这一研究成果极大地减少了肝脏损伤和其他严重副作用的风险。

MyoAAV 1A在全身注射后能高效地转导小鼠骨骼肌，将成年C57BL/ 6J小鼠注射1E+12 vg（~4E+13 vg/kg）AAV9-或MyoAAV 1A-CMV-EGFP，并分析注射2周后不同组织中的转基因表达和载体基因组丰度。整体荧光成像结果显示，与注射aav9的小鼠相比，注射MyoAAV 1A的小鼠肌肉中的荧光强度更强，重要的是，MyoAAV 1A转导的心脏比AAV9更有效，而心脏是许多遗传性肌病中更重要的受影响的器官。免疫荧光分析进一步证实注射MyoAAV 1A小鼠肌纤维和心肌细胞中转基因表达很强。

作者在NHPs筛选出11个对肌肉组织有最高度嗜性的突变体：MyoAAV 3A-F and MyoAAV 4A-E，并在小鼠和NHPs中对这些突变体的转导效率进行了测试。

基因mRNA的定量分析结果显示，与AAVrh74和AAV9相比，MyoAAV 4A、MyoAAV 4E、MyoAAV 3A和MyoAAV 4C四种突变体在NHP骨骼肌中转导效率最高，在小鼠胫骨前肌、二头肌、腘绳肌、三头肌、心脏等肌肉组织中也有很高的转导效率，并且不在肝脏中富集。

作者又评估了这四种突变体的产量，用MyoAAV 3A、4A、4C和4E，以及AAVrh74和AAV9分别制备了6种不同基因过表达的rAAVs病毒，结果显示AAV9在HEK293细胞中得到最高的滴度，所有MyoAAV变体与AAVrh74产生相似或更高的病毒滴度。